我们在做液相色谱实验时经常会遇到各种峰形问题，针对不同原因的峰形异常我们会有不同的解决办法。

一、碱性化合物峰形拖尾的原因

C18柱是在分析碱性物质中最常用的固定相。由于十八烷基碳链很长，在键合的时候空间位阻会很大，导致键合率不高，容易残留有大量未键合的硅羟基。在很多流动相条件下，这些游离的硅羟基容易电离，与碱性化合物电离出来的阳离子产生二级作用，导致目标化合物不能非常顺利的洗脱，从而产生拖尾。

扫尾剂：峰前伸或拖尾时，在流动相中加入一定的物质使峰型变好，不同的物质加的就不同，例如做酸加酸，做碱加碱，还有的加缓冲盐。

反相高效液相色潽法中常用的扫尾剂为醋酸铵、三乙胺、二乙胺、乙腈等。

二、流动相改性剂

①常规改性剂     

a.酸性试剂有醋酸、甲酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、高氯酸；     

b.盐酸中氯离子对不锈钢管路有腐蚀作用，极少加到流动相中；     

c.硝酸有氧化性，可用于管路的清洗，不建议单独添加到流动相中；     

d.碱性试剂有氨水、氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、二乙胺等。

三乙胺是改性剂，通常加在反相或离子对流动相中，主要的作用是减少样品中碱性组分的拖尾。因为C18键合相上残留的硅羟基容易与碱性化合物结合而造成峰脱尾，所以，在流动相中加入碱性的三乙胺后可以首先与硅羟基结合，从而阻碍了样品中碱性化合物与硅羟基的作用，减少了峰拖尾。一般用量在10-20 mM或流动相体积的0.1-0.3%。在实际使用过程中，建议不要单独使用碱性三乙胺，最好与其它试剂组成缓冲体系。

加入三乙胺改善峰形的时候，有两点需要注意：

1）三乙胺的碱性很强，加入三乙胺后流动相的pH可能超出色谱柱的使用范围，对色谱柱造成损伤。pH的改变也会导致出峰时间的显著变化，可能引起的其它问题，建议流动相中加入三乙胺后回调至未加入前的pH值。通常即使pH回调过后，由于三乙胺成为了固定相的一部分，保留时间也有较大变化；

2）三乙胺在210nm处有比较强的吸收，如果液相方法中检测波长在210nm以下测定时需要谨慎使用。无机（有机）盐种类很多，往往组成缓冲系统，比较常用的有醋酸钠、醋酸铵、甲酸钠、甲酸铵、磷酸二氢钾（钠、铵）、磷酸氢二钾（钠、铵）、硫酸钾（钠）、其它的还有酒石酸钾钠、柠檬酸钠、草酸钠、EDTA、碳酸铵等。

②专用的离子对试剂

流动相中加入离子对试剂后，它可以与被分析物（多为在溶液中带与离子对试剂相反的电荷）结合成离子对而呈电中性，这样非极性就表现出来，从而增加了在反相色谱柱上的保留作用。这种分离模式叫做反相离子对色谱。

a.酸性化合物：最常见是四丁基氢氧化胺（TBA）、四丁基氯化胺、四丁基溴化胺四丁基铵盐在pH值等于7.5的条件下与强酸和弱酸形成离子对并具有缓冲抑制弱碱的作用；

b.碱性化合物：庚烷磺酸钠、己烷磺酸钠、辛烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等。多烷基磺酸盐在pH值等于3.5的条件下与强碱和弱碱形成离子对并缓冲抑制弱酸离子。

PS:流动相改性剂，分析纯少量加入基本可以满足要求。但离子对试剂则要求色谱纯，分析纯的往往不能满足分析要求。

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